viagra super force

+7(495) 123-XXXX  г. Москва

Выпуски журналов

  • Серия
  • Серия
  • Серия
  • Серия
  • Журнал
  • Журнал
  • Журнал
  • Журнал

Р.А. Осешнюк,  (Аспирант, ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург)

Е.А. Колобова,  (Аспирант, ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России, Санкт-Петербург)

И.Э. Ушал,  (К.м.н., ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России, Санкт-Петербург)

Г.Г. Родионов,  (Д.м.н., ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России, Санкт-Петербург)

П.Д. Шабанов,  (Д.м.н., ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург)

Серия «Естественные и Технические науки» # ФЕВРАЛЬ  2017

Терапевтический лекарственный мониторинг (ТЛМ)
С целью терапевтического лекарственного мониторинга разработаны методы количественного определения фармакологических препаратов химиотерапевтического назначения – циклоспорин А и эверолимуса. В основе разработанных методов – высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС). Все методики успешно реализованы при анализе образцов, полученных от пациентов.

Ключевые слова: Терапевтический лекарственный мониторинг (ТЛМ), фармакокинетика, ВЭЖХ-МС, циклоспорин А, эверолимус.

 

Введение

Опасность развития тяжелых, подчас необратимых осложнений вследствие лекарственной терапии привлекают к проблеме безопасности использования лекарственных препаратов внимание практических врачей и пациентов [1, 3].

ВОЗ формулирует неблагоприятные побочные реакции как любые непреднамеренные и вредные для организма человека реакции, которые возникают при использовании лекарственных препаратов в обычных дозах с целью профилактики, лечения и диагностики или для изменения физиологических функций.

Дети и пожилые пациенты являются теми группами населения, которые наиболее часто страдают от лекарственных осложнений [2, 6].

Лекарственный мониторинг - это измерение концентраций лекарственных средств в биологических средах организма (цельная кровь, плазма крови, моча и др.) с целью подбора дозировки и режима приема препарата, обеспечивающих его оптимальную концентрацию в организме для достижения максимального терапевтического эффекта при минимальных токсическом. Это особенно важно при использовании веществ с узким терапевтическим диапозоном – ряда антибиотиков, антиаритмических препаратов, противосудорожных и противоэпилептических препаратов, иммунодепрессантов.

Согласно п. 5.4 положения об организации деятельности лаборатории клинической фармакокинетики и фармакогенетики утвержденному приказом Минздрава РФ от 22 октября 2003 г. N 494, лаборатория с целью профилактики неблагоприятных побочных реакций ЛС должна проводить фармакокинетические исследования, включающие основные группы и отдельные препараты:

  • антиконвульсанты (фенобарбитал, карбамазепин, вальпроевая кислота);
  • диметилксантины (теофиллин);
  • ванкомицин;
  • хинидин, новокаинамид, пропафенон, прокаинамид;
  • фуросемид;
  • метотрексат.

Перечень препаратов, подлежащих обязательному лекарственному мониторингу согласно приказу № 64 МЗ РФ от 21 февраля 2000 г. включает в себя:

  • лекарственные средства, действующие на сердечно-сосудистую систему (дигитоксин, дигоксин, дизопирамид, лидокаин, мексилетин, хинидин, теофиллин);
  • лекарственные средства, действующие на ЦНС (амитриптилин, галоперидол, диазепам, имипрамин, клоназепам, оксазепам, сиднокарб, хлордиазепоксид, хлорпромазин);
  • противосудорожные средства (карбамазепин, фенитоин, фенобарбитал, этосукцимид, вальпроат натрия);
  • нестероидные противовоспалительные средства (ацетоминафен, индометацин);
  • противомикробные средства (амикацин, амфотерицин, гентамицин, ванкомицин);
  • иммуносупрессоры (циклоспорин);
  • средства для лечения онкологических заболеваний (метотрексат).

Для реализации ТЛМ оптимальным является применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС), как наиболее высокочувствительного, селективного и быстрого. Метод ВЭЖХ-МС/МС позволяет определять весьма широкий спектр препаратов, в то время, как другие методы, например, основанные на взаимодействии определяемого вещества с моноклональными антителами к нему, требуют специальных наборов, которые охватывают далеко не весь диапазон препаратов, рекомендованных к фармакологическому мониторингу.

Примером ситуаций, когда необходим ТЛМ препаратов с узким терапевтическим диапазоном, может быть лечение циклоспорином А (терапевтический диапазон 100-400 нг/мл) и эверолимусом (терапевтический диапазон 2-12 нг/мл). Оба препарата относятся к группе иммунодепрессантов, применяемых с целью предотвращения отторжения трансплантата, а также с целью предотвращения реакции «трансплантат против хозяина» путем создания контролируемой иммуносупрессии [4,7].

Связь между базальной концентрацией эверолимуса и частотой подтвержденного биопсией острого отторжения и тромбоцитопении была выявлена у реципиентов почки и сердца в течение 6 мес после трансплантации [5]. При этом превышение терапевтической концентрации вызывает побочные реакции, зачастую достаточно тяжелые. Избыточная иммуносупрессия предрасполагает к развитию инфекций (часто оппортунистических), имеются данные о развитии сепсиса и фатальных инфекций. Также возможно развитие злокачественных новообразований.

При назначении препаратов, следует помнить, что концентрация препаратов в крови пациента зависит не только от дозы препарата, на нее оказывают существенное влияние такие факторы, как эффективность всасывания препарата, связывание с белками плазмы, эффективность метаболизма и выведения препарата. При этом терапевтическая эффективность напрямую зависит именно от концентрации действующего вещества в крови, для определения которой необходим ТЛМ [2].

Материалы и методы

    Аналитическое оборудование: высокоэффективный жидкостной хроматограф «Agilent 1200» с тройным квадруполем «Agilent 6440» ВЭЖХ-МС/МС; хроматографическая колонка Zorbax Eclips Plus-C18 4,6×100 мм×3,5 мкм или Poroshell 120 EC-C18 3.0×50 мм×2.7 мкм.

Оборудования для пробоподготовки:

  • шкаф лабораторный в комплекте Koettermann 1800x900x2250;
  • холодильник «ATLANT»;
  • центрифуга Allegra 25R (BECKMAN COULTER, США);
  • весы «Sartorius» (Германия) с измерением массы до 250 г. С точностью 0,0001-0,00001 г.;
  • вихревая мешалка типа «Vortex»;
  • автоматические дозаторы фирмы Biohit с дозируемым объемом от 0,5 до 5000 мкл.

Расходные материалы:

  • микропробирки типа «эппендорф»;
  • полипропиленовые флаконы (виалы) для анализируемых и градуировочных растворов вместимостью 250 мкл с защелкивающимися крышками фирмы Agilent.

Реактивы:

  • циклоспорин А, >97% сухое вещество; (TCI, Japan – C2408),
  • эверолимус (fluka – 07741-10 mg-F);
  • внутренние стандарты (циклоспорин D MS1112 – ClinMass – 18mkg), эверолимус d4- Santa Cruz Biotechnology – sc-218453);
  • муравьиная кислота Agilent, номер по каталогу G 2453-85060.;
  • метанол Baker HPLC analyzed» HPLC Far UV/ Gradient Grade;
  • формиат аммония (fluka for HPLC ≥ 99.0 %);
  • Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Приготовление стоковых растворов (1 мг/мл):

1. Фабричную навеску эверолимуса 10.0 мг помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл и добавляли 10 мл метанола. Содержимое колбы тщательно перемешивали до полного растворения эверолимуса.

2. Во флакон с фабричной навеской эверолимуса-d4 1 мг добавляли 1 мл метанола. Содержимое флакона тщательно перемешивали до полного растворения эверолимуса-d4.

3. Навеску циклоспорина А (100.0 ± 0.1 мг) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл и добавляли около 50 мл метанола. Содержимое колбы тщательно перемешивали до полного растворения циклоспорина А и доводили до метки метанолом.

Приготовление рабочих растворов:

1. Рабочие растворы с массовой концентрацией эверолимуса 10.0, 20.0, 32.5, 75.0, 100.0, 125.0, 150.0, 175.0, 200.0 нг/мл (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9) готовили из стандартного раствора, путем разбавления метанолом.

2. Рабочие растворы с массовой концентрацией циклоспорина А 250.0, 500.0, 1000.0, 2500.0, 5000.0, 7500.0, 1000.0 нг/мл (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7) готовили из стандартного раствора, путем разбавления метанолом.

3. Рабочий раствор внутреннего стандарта с массовой концентрацией эверолимус-d4 100 нг/мл готовили из стандартного раствора, путем разбавления метанолом.

4. Во флакон с фабричной навеской циклоспорина Д 18 мкг добавляли 5 мл 70 % метанола. Содержимое флакона тщательно перемешивали до полного растворения циклоспорина Д.

Приготовление градуировочных растворов:

    1. Растворы для градуировки хроматографа (№ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9), что соответствует массовой концентрации эверолимуса в цельной крови от 1 до 20 нг/мл, готовили непосредственно перед проведением измерений в микроцентрифужных пробирках (типа «Эппендорф») вместимостью 1.5 мл. К 90 мкл интактной крови добавляли 10 мкл соответствующего рабочего раствора эверолимуса, приготовленного по п. 3.1.3., и 20 мкл рабочего раствора внутреннего стандарта - эверолимус-d4, перемешивали, затем, для осаждения белков, добавляли 200 мкл 1% раствора сульфата цинка в 80 % метаноле. Содержимое пробирок тщательно перемешивали с помощью перемешивающего устройства типа Vortex в течение 10 мин, после чего центрифугировали 10 мин со скоростью 4000 об/мин. К 100 мкл надосадочного слоя добавляли 100 мкл метанола для осаждения солевых примесей, пермещивали, затем центрифугировали в течение 5 минут со скоростью 4000 об/мин. Надосадочный слой переносили в чистые виалы и анализировали методом ВЭЖХ/МС/МС путем ввода 5 мкл образца.

    2. Растворы для градуировки хроматографа (№ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7), что соответствует массовой концентрации циклоспорина А в цельной крови от 25 до 1000 нг/мл, готовили непосредственно перед проведением измерений в микроцентрифужных пробирках (типа «Эппендорф») вместимостью 1.5 мл. К 90 мкл интактной крови добавляли 10 мкл соответствующего рабочего раствора циклоспорина А, 10 мкл рабочего раствора внутреннего стандарта – циклоспорина Д, перемешивали, затем, для осаждения белков, добавляли 200 мкл 1% раствора сульфата цинка в 80 % метаноле. Содержимое пробирок тщательно перемешивали с помощью перемешивающего устройства типа Vortex в течение 10 мин, после чего центрифугировали 10 мин со скоростью 4000 об/мин. К 100 мкл надосадочного слоя добавляли 100 мкл метанола для осаждения солевых примесей, пермещивали, затем центрифугировали в течение 5 минут со скоростью 4000 об/мин. Надосадочный слой переносили в чистые виалы и анализировали методом ВЭЖХ/МС/МС путем ввода 5 мкл образца.

Параметры хроматографической системы:

Работа выполнена с помощью аналитического комплекса высокоэффективный жидкостной хроматограф «Agilent 1200» с тройным квадруполем «Agilent 6440». Параметры хроматографической системы приведены в табл. 1-3.

Читать полный текст статьи …


СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. Астахова А.В., Брайцева Е.В., Лепахин В.К. Контроль безопасности лекарственных средств // Фармация, 2000, 4, 38-40.
2. Дедов И.И., Тюльпаков А.Н., Чехонин В.П. [и др.]. Персонализированная медицина: современное состояние и перспективы, ВЕСТНИК РАМН /2012/ № 12
3. Чекалаева И.И. Фальсификация лекарственных средств – проблема решаемая // Новая аптека, 2001, 6, 48 –51.
4. Brignol N, McMalon LM, Luo S, et al. High-throughput semi-automated 96-well liquid/liquid extraction and liquid chromatography/mass spectrometric analysis of everolimus (RAD001) and cyclosporine A (CsA) in whole blood. Rapid Commun Mass Spectrom 2002;15:1-10. --2
5. Kovarik JM, Kaplan B, Silva HT, et al. Exposure-response relationships for everolimus in de novo kidney transplantation: defining a therapeutic range. Transplantation 2002; 73(6):920-5.
6. Mannesse C.K., Derkx F.H., de Ridder M.A., Man in’t Veld A.J., van der Cammen T.J. Contribution of adverse drug reactions to hospital admission of older patients, Age Ageing, 2000, 29 (1), 35-39.
7. Norman В. Roberts et al. Evaluation of a novel semi-automated HPLC procedure for whole blood cyclosporin A confirms equivalence to adjusted monoclonal values from Abbott TDx, Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, 2005, v.43, No 2, p.228-236
 



© 
Р.А. Осешнюк, Е.А. Колобова, И.Э. Ушал, Г.Г. Родионов, П.Д. Шабанов, Журнал "Современная наука: актуальные проблемы теории и практики".
 

 

 

 
SCROLL TO TOP

 Rambler's Top100 @Mail.ru